熒光PCR實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)所需的耗材有八連管，光學(xué)級(jí)八連管蓋子，光學(xué)級(jí)96孔板封膜，96孔板等。熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過程分為RAN的提取，反轉(zhuǎn)錄, 熒光定量PCR反應(yīng),  數(shù)據(jù)分析。做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)有幾個(gè)關(guān)鍵步驟需要注意1.應(yīng)有合適數(shù)目的生物學(xué)重復(fù)及正確的對(duì)照樣品設(shè)置2.樣品的獲得應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)流程中對(duì)采樣，處理和保存的要求及確保重復(fù)性并減小重復(fù)樣品間的標(biāo)準(zhǔn)偏差。3對(duì)RAN的純度和完整性進(jìn)行質(zhì)量控制。4.將總RAN反轉(zhuǎn)錄成cDNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。5.試驗(yàn)中正確的引物設(shè)計(jì)，引物退火溫度確定，基因擴(kuò)增效率摸索。6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析中內(nèi)參基因選擇和統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算。在做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)過程中凍干工藝優(yōu)化也起著重要作用。需要選擇適合的凍干機(jī)，如Pilot10-15EP解決用戶對(duì)凍干曲線不熟練的問題,縮短研發(fā)、小試周期, 提高凍干產(chǎn)品的一致性,解決用戶在應(yīng)用當(dāng)中的技術(shù)問題。