實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)的注意事項(xiàng)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)需要先制備混合反應(yīng)液，大劑量包裝的反應(yīng)試劑，使用前進(jìn)行分裝，盡量減少試劑的反復(fù)凍融。建議所有樣本要有三個(gè)重復(fù)。實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程時(shí)需注意以下幾點(diǎn)，有利于避免實(shí)驗(yàn)污染問題。1.用稀釋的漂白劑或凈化劑擦拭凈化臺(tái)。2.在的配有紫外燈超凈式或者超靜臺(tái)中準(zhǔn)備樣品，理想的是樣品的準(zhǔn)備與PCR的擴(kuò)增分開在不同的區(qū)域完成。3.在樣品制備和配制反應(yīng)過(guò)程中要勤換手頭。4.勤用稀釋的漂白劑擦拭移液器。5.只使用PCR級(jí)的水和PCR試劑進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)。5. 用帶旋蓋的 EP 管稀釋和配制反應(yīng)液。6. 在進(jìn)行 PCR 實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)模板的對(duì)照來(lái)驗(yàn)證有無(wú)污染發(fā)生，而且用熱啟動(dòng)酶防止反應(yīng)開始之前的非特異性擴(kuò)增。在選擇適合做熒光定量PCR試劑凍干的凍干機(jī)時(shí)，,要具有完整的PAT控制技術(shù)，可對(duì)凍干過(guò)程進(jìn)行完整的控制和分析監(jiān)控。包括預(yù)凍全過(guò)程控制、預(yù)凍結(jié)束判定、升華全過(guò)程控制、升華結(jié)束判定、解析全過(guò)程控制及凍干結(jié)束判定。板層溫度均一度±1℃。系統(tǒng)極限真空度±1Pa。系統(tǒng)真空泄露率＜3Pa.L/S。外界干擾熱量屏蔽。共晶點(diǎn)測(cè)試儀助力工藝開發(fā)。全進(jìn)口配件。建議提高熒光PCR凍干的相關(guān)性。